CD1D Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402435-ACT

CD1D codifica CD1d, una molecola di presentazione dell’antigene simile alle MHC di classe I non classiche, che lega antigeni lipidici e glicolipidici e li espone sulla superficie cellulare per il riconoscimento da parte delle cellule T invarianti natural killer (iNKT). Modellando l’attivazione delle cellule iNKT e i conseguenti programmi citochinici, CD1d contribuisce alla sorveglianza immunitaria, alla tolleranza e alla regolazione dell’infiammazione nei diversi tessuti. La presentazione di antigeni lipidici dipendente da CD1d si interseca con il traffico endosomiale, la processazione dell’antigene e le vie di segnalazione dei linfociti “innate-like”, influenzando l’immunologia dei tumori, la biologia delle infezioni e gli stati infiammatori cronici. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CD1D sono state associate a risposte immunitarie dis-regolate osservate nell’autoimmunità, nell’infiammazione metabolica e nei microambienti tumorali.

CD1D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD1D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD1D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD1D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD1D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD1D. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD1D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD1D nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD1D nelle cellule tumorali con espressione di CD1D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.