CD1C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403813-ACT

CD1C (molecola CD1c) è una glicoproteina di presentazione dell’antigene simile alle MHC di classe I non classiche, espressa prevalentemente su sottopopolazioni di cellule dendritiche e su alcune cellule B, dove lega ed espone ai linfociti T antigeni lipidici e glicolipidici. Mediando la presentazione di ligandi lipidici microbici e self, CD1C contribuisce all’avvio e alla modulazione delle risposte immunitarie adattative e influenza la polarizzazione delle citochine nel contesto delle vie di processamento e presentazione dell’antigene. Le cellule dendritiche CD1C-positive partecipano al riconoscimento dei patogeni e al dialogo con i programmi dell’immunità innata, collegando la disponibilità di antigeni lipidici all’attivazione dei linfociti T e all’omeostasi immunitaria. Alterazioni dell’espressione di CD1C o del riconoscimento immunitario ristretto a CD1c sono state investigate in condizioni infiammatorie e autoimmuni, nelle risposte alle malattie infettive e nel rimodellamento immunitario associato ai tumori.

CD1C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD1C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD1C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD1C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD1C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD1C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD1C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD1C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD1C nelle cellule tumorali con espressione di CD1C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.