CD154 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423452

Panoramica

Cd40lg codifica CD154 (ligando di CD40), una proteina di membrana di tipo II espressa principalmente sui linfociti T attivati, che interagisce con CD40 su cellule B, cellule dendritiche e macrofagi per coordinare le risposte immunitarie adattative. La segnalazione CD154–CD40 induce l’attivazione delle vie NF-κB e MAPK, promuove la produzione di citochine, sostiene la proliferazione delle cellule B e le reazioni del centro germinativo, e contribuisce alla commutazione di classe delle immunoglobuline. Nei modelli murini, un’attività alterata di Cd40lg influenza la tolleranza immunitaria, la presentazione dell’antigene e i circuiti infiammatori rilevanti per l’autoimmunità, la biologia delle infezioni e l’immunologia dei tumori. L’analisi della costimolazione dipendente da CD154 è quindi centrale per lo studio del crosstalk tra linfociti T e APC e dell’organizzazione dei tessuti linfoidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD154 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd40lg in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd40lg insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd40lg a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD154.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd40lg per lo studio della segnalazione di CD154, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd40lg critici per la funzione di CD154
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd40lg per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD154 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD154 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd40lg. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD154 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD154 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd40lg per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd40lg definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.