CD151 Plasmide Double Nickase (h): sc-401969-NIC

CD151 è una glicoproteina di membrana della famiglia delle tetraspanine che organizza microdomini arricchiti in tetraspanine e modula l’attività e il traffico dei recettori partner, in particolare delle integrine come α3β1, α6β1 e α6β4. Attraverso queste interazioni, CD151 influenza l’adesione cellulare, l’espansione (spreading), la migrazione e la trasduzione del segnale associate al rimodellamento del citoscheletro, alla dinamica delle adesioni focali e all’interazione con la matrice extracellulare. L’organizzazione di membrana dipendente da CD151 interessa processi quali l’integrità epiteliale, il comportamento angiogenico e la motilità delle cellule immunitarie; inoltre, un’alterata espressione o funzione di CD151 è stata associata alla progressione tumorale, al potenziale metastatico e a fenotipi di rimodellamento tissutale. In quanto regolatore con funzione di scaffold, CD151 rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per analizzare le reti di segnalazione associate alle integrine e la compartimentalizzazione della membrana nelle cellule umane.

CD151 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD151 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD151. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD151. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD151 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.