CD137 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405068

Panoramica

TNFRSF9 codifica CD137 (4-1BB), un recettore co-stimolatorio inducibile della superfamiglia dei recettori del TNF, espresso sui linfociti T attivati e su altri sottotipi immunitari. In seguito al legame con il suo ligando, CD137 recluta adattatori TRAF per attivare le vie di segnalazione NF-κB e MAPK, promuovendo sopravvivenza cellulare, proliferazione, produzione di citochine e riprogrammazione metabolica durante le risposte immunitarie. Questa via contribuisce alla regolazione dell’attività dei linfociti citotossici, della funzione delle cellule dendritiche e della segnalazione infiammatoria nel microambiente tissutale. Una deregolazione della segnalazione TNFRSF9/CD137 è stata associata a stati alterati di attivazione immunitaria osservati in ambiti di ricerca su immunologia del cancro, infezioni croniche e patologie autoimmuni o infiammatorie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD137 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNFRSF9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNFRSF9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNFRSF9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD137.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNFRSF9 per lo studio della segnalazione di CD137, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNFRSF9 critici per la funzione di CD137
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNFRSF9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD137 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD137 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNFRSF9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD137 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD137 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNFRSF9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNFRSF9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.