Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CCZ1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417084
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CCZ1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CCZ1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CCZ1 Antibody (B-7): sc-514290
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CCZ1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417084 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CCZ1B codifica la proteina CCZ1, un componente centrale del complesso fattore di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) CCZ1–MON1, che attiva RAB7 per coordinare la maturazione degli endosomi tardivi e la fusione tra endosomi e lisosomi. Attraverso la regolazione del traffico di membrana dipendente da RAB7, CCZ1 sostiene la consegna ai lisosomi e il turnover di recettori e carichi internalizzati, influenzando il flusso autofagia–lisosoma e la proteostasi cellulare. L’alterazione di questa via può compromettere l’omeostasi degli organelli, modificare la downregulation dei recettori di segnalazione e influenzare le risposte allo stress metabolico e proteotossico. Di conseguenza, CCZ1B è di interesse in studi sulla neurodegenerazione, sull’adattamento delle cellule tumorali e sulla funzione delle cellule immunitarie, ambiti in cui il traffico endolisosomiale e l’autofagia vengono frequentemente rimodellati.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCZ1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCZ1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCZ1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCZ1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCZ1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCZ1B per lo studio della segnalazione di CCZ1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CCZ1B critici per la funzione di CCZ1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCZ1B per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CCZ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CCZ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCZ1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CCZ1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CCZ1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCZ1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCZ1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.