CCL14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406423

Panoramica

CCL14 codifica una chemochina CC secreta che contribuisce a coordinare il traffico dei leucociti interagendo con i recettori delle chemochine su monociti, linfociti e altre sottopopolazioni di cellule immunitarie, modellando così i gradienti infiammatori e il posizionamento delle cellule immuni all’interno dei tessuti. Come parte della più ampia rete delle chemochine, CCL14 contribuisce alla chemiotassi, alla modulazione della segnalazione delle citochine e al cross-talk con vie che regolano l’attivazione endoteliale e il rimodellamento della matrice extracellulare. Una segnalazione chemiocinica disregolata che coinvolge CCL14 è stata associata a pattern alterati di infiltrazione immunitaria osservati in stati infiammatori cronici e nell’infiammazione associata ai tumori, dove cambiamenti nei segnali chemiocinici possono influenzare la sorveglianza immunitaria e le interazioni con lo stroma. Di conseguenza, CCL14 è spesso studiato in contesti quali saggi di migrazione delle cellule immunitarie, profilazione della segnalazione infiammatoria e mappatura a livello di sistema delle reti di chemochine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCL14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCL14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCL14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCL14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCL14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCL14 per lo studio della segnalazione di CCL14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCL14 critici per la funzione di CCL14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCL14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CCL14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CCL14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCL14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CCL14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CCL14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCL14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCL14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.