CCDC90A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406721

Panoramica

MCUR1 (noto anche come CCDC90A) codifica una proteina della membrana interna mitocondriale che sostiene l’ingresso di calcio nei mitocondri modulando il complesso dell’uniportatore del calcio mitocondriale. Regolando i livelli di Ca²⁺ nella matrice, CCDC90A collega la segnalazione del calcio alla fosforilazione ossidativa, all’attività degli enzimi del ciclo di Krebs (TCA) e all’omeostasi bioenergetica cellulare, con effetti a valle sulle specie reattive dell’ossigeno e sulle risposte allo stress. L’alterazione della funzione di MCUR1/CCDC90A è stata associata a cambiamenti del metabolismo mitocondriale e a una maggiore vulnerabilità alla disfunzione mitocondriale, rendendolo rilevante per studi sullo stress cardiometabolico, la neurobiologia e l’adattamento metabolico delle cellule tumorali. In quanto nodo di segnalazione mitocondriale, viene spesso analizzato nei percorsi che collegano la gestione del calcio, la suscettibilità all’apoptosi e il controllo di qualità mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC90A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MCUR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MCUR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MCUR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCDC90A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MCUR1 per lo studio della segnalazione di CCDC90A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MCUR1 critici per la funzione di CCDC90A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MCUR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CCDC90A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CCDC90A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MCUR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CCDC90A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CCDC90A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MCUR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MCUR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.