CCDC8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406749

Panoramica

CCDC8 (coiled-coil domain containing 8) codifica una proteina citoplasmatica con dominio coiled-coil implicata nella regolazione dei programmi di crescita e sopravvivenza cellulare, con collegamenti riportati alla segnalazione in risposta allo stress e al controllo della capacità proliferativa. Studi funzionali suggeriscono che CCDC8 possa influenzare l’apoptosi e processi legati ai checkpoint, collegandola a vie che modellano l’omeostasi cellulare e la suscettibilità alla trasformazione. L’alterazione dell’espressione o la perdita di CCDC8 sono state esplorate nel contesto della biologia tumorale, dove le modifiche nella regolazione della crescita e nella segnalazione di sopravvivenza sono caratteristiche comuni. Questi attributi rendono CCDC8 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi che collegano le funzioni di proteine del citoscheletro o con ruolo di impalcatura (scaffold) alla trasduzione del segnale e alle decisioni sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCDC8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCDC8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCDC8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CCDC8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCDC8 per lo studio della segnalazione di CCDC8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCDC8 critici per la funzione di CCDC8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCDC8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CCDC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CCDC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCDC8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CCDC8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CCDC8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCDC8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCDC8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.