CBX7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402903-ACT

CBX7 (chromobox 7) è una proteina del gruppo Polycomb che funziona come “lettore” della cromatina all’interno del PRC1 canonico, riconoscendo H3K27me3 e contribuendo a mantenere una repressione trascrizionale stabile. Attraverso la regolazione epigenetica mediata dai Polycomb, CBX7 influenza il controllo del ciclo cellulare, l’impegno di linea, la senescenza e il mantenimento a lungo termine dei programmi di identità cellulare. Un’espressione alterata di CBX7 o un’attività PRC1 deregolata sono state associate a reti aberranti di silenziamento genico osservate in diversi contesti tumorali e in fenotipi legati allo sviluppo e all’invecchiamento. In quanto regolatore nucleare della cromatina, CBX7 è comunemente studiato in vie che governano la memoria trascrizionale e la compattazione della cromatina.

CBX7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CBX7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CBX7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CBX7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CBX7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CBX7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CBX7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CBX7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CBX7 nelle cellule tumorali con espressione di CBX7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.