CBS Plasmide Double Nickase (h): sc-400877-NIC

La CBS umana (cistationina β-sintasi) è un enzima dipendente dal fosfato di piridossale che catalizza il primo passaggio impegnante della via della transulfurazione, convertendo omocisteina e serina in cistationina e collegando il metabolismo dei gruppi a un carbonio alla biosintesi di cisteina e glutatione. Regolando la rimozione dell’omocisteina e la capacità di tamponamento redox, la CBS influenza il potenziale di metilazione, le risposte allo stress ossidativo e, più in generale, il metabolismo degli amminoacidi solforati. L’attività della CBS contribuisce inoltre alla produzione endogena di solfuro di idrogeno (H₂S), una molecola di segnalazione implicata nella funzione mitocondriale e nell’adattamento cellulare allo stress. La disregolazione della CBS è associata ad alterazioni dell’omeostasi dell’omocisteina ed è stata studiata in contesti che includono errori congeniti del metabolismo e fenotipi neurovascolari e infiammatori rilevanti per la ricerca di base.

CBS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CBS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CBS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CBS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CBS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.