CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400648-NIC

CNR1 codifica il recettore dei cannabinoidi 1 (CB1), un GPCR accoppiato a Gi/o che risponde agli endocannabinoidi regolando l’attività dell’adenilil ciclasi, la segnalazione cAMP/PKA, la conduttanza dei canali ionici e le vie a valle MAPK/ERK e correlate a PI3K. CB1 è ampiamente espresso nel sistema nervoso e contribuisce alla trasmissione sinaptica, al rilascio di neurotrasmettitori e alla plasticità dipendente dall’attività, con ulteriori ruoli in processi metabolici periferici e immuno-correlati. Alterazioni della segnalazione CNR1/CB1 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e neurodegenerativi, all’elaborazione del dolore e a disfunzioni metaboliche, rendendolo un bersaglio comunemente studiato nella farmacologia dei GPCR e nei circuiti neuromodulatori. Nei modelli cellulari, la perturbazione di CNR1 viene utilizzata per indagare la desensibilizzazione e l’internalizzazione del recettore, il bias di accoppiamento alle proteine G e il cross-talk tra vie che influenzano l’eccitabilità neuronale e la segnalazione infiammatoria.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CNR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CNR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CNR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CNR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.