CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419722-ACT

Il gene murino Cnr1 codifica il recettore dei cannabinoidi 1 (CB1/CNR1), un GPCR accoppiato a Gi/o che risponde agli endocannabinoidi come l’anandamide e il 2-arachidonoilglicerolo, regolando la trasmissione sinaptica e la segnalazione neuroendocrina. L’attivazione di CB1 in genere sopprime l’adenilil ciclasi e la via di segnalazione cAMP/PKA, modula i percorsi MAPK/ERK e controlla l’attività dei canali ionici per affinare il rilascio di neurotrasmettitori e l’eccitabilità neuronale. Nel SNC, CNR1 è centrale in processi neuromodulatori quali ricompensa, nocicezione, appetito, risposta allo stress, apprendimento e memoria, con ulteriori ruoli nella segnalazione metabolica periferica e in quella legata al sistema immunitario. Alterazioni della segnalazione di CNR1 sono spesso studiate, nei modelli murini, nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici, vie associate al dolore e disregolazione metabolica.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cnr1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cnr1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cnr1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cnr1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 nelle cellule tumorali con espressione di Cnr1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.