caveolin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419479-ACT

Il gene murino **Cav1** codifica la caveolina-1, una proteina di impalcatura delle caveole che organizza microdomini di membrana e regola endocitosi, meccanotrasduzione e omeostasi lipidica. La caveolina-1 modula la segnalazione attraverso vie che includono integrina/FAK–SRC, MAPK/ERK, PI3K–AKT ed eNOS, influenzando adesione e migrazione cellulare e le risposte vascolari dipendenti dall’ossido nitrico. Nei compartimenti immunitario e stromale, Cav1 influisce sulla segnalazione delle citochine e sul traffico vescicolare, mentre nel tessuto adiposo e in quello endoteliale contribuisce alla gestione dei lipidi e alla funzione di barriera. Un’espressione deregolata della caveolina-1 o alterazioni della dinamica delle caveole sono state associate a risposte fibrotiche modificate, fenotipi metabolici, disfunzioni polmonari e vascolari e, in modo dipendente dal contesto, a invasione e metastasi delle cellule tumorali, a supporto di un’ampia utilità negli studi dei meccanismi di malattia.

caveolin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cav1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

caveolin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cav1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cav1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di caveolin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cav1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da caveolin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via caveolin-1 nelle cellule tumorali con espressione di Cav1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.