cathepsin S Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419881

Panoramica

Ctss codifica la catepsina S murina, una proteasi cisteinica lisosomiale con una marcata espressione nelle cellule presentanti l’antigene, dove promuove l’elaborazione proteolitica delle proteine internalizzate. La catepsina S è un componente chiave della via di presentazione dell’antigene tramite MHC di classe II, poiché scinde la catena invariante e consente il caricamento dei peptidi, collegando la proteostasi endolisosomiale all’attivazione dell’immunità adattativa. Oltre al processamento dell’antigene, la catepsina S contribuisce al turnover della matrice extracellulare e alla segnalazione infiammatoria nelle linee mieloidi, supportando studi sul traffico dei leucociti e sul rimodellamento tissutale. Un’attività di CTSS deregolata è stata associata a patologie immuno-mediate e a stati infiammatori cronici, motivando ricerche meccanicistiche in modelli di immunologia e infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin S (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ctss in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ctss insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ctss a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cathepsin S.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ctss per lo studio della segnalazione di cathepsin S, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ctss critici per la funzione di cathepsin S
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ctss per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cathepsin S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal cathepsin S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ctss. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cathepsin S Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR cathepsin S (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ctss per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ctss definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.