cathepsin F Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405658

Panoramica

CTSF codifica la catepsina F, una proteasi cisteinica lisosomiale della famiglia delle papaina che contribuisce al turnover proteolitico di substrati intracellulari e internalizzati per endocitosi. La catepsina F partecipa alla degradazione mediata dai lisosomi, al flusso autofagia–lisosoma e alle vie di processamento dell’antigene che regolano l’omeostasi cellulare e la segnalazione immunitaria. L’alterazione dell’attività delle proteasi lisosomiali può modificare il controllo di qualità delle proteine, il rimodellamento degli organelli e il processamento della matrice extracellulare attraverso effetti a valle sul traffico endo-lisosomiale. CTSF è stato studiato nel contesto di fenotipi neurodegenerativi e infiammatori, in cui la disfunzione lisosomiale e la proteostasi compromessa sono elementi meccanicistici chiave.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin F (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CTSF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CTSF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CTSF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cathepsin F.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CTSF per lo studio della segnalazione di cathepsin F, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CTSF critici per la funzione di cathepsin F
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CTSF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cathepsin F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cathepsin F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CTSF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cathepsin F Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cathepsin F (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CTSF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CTSF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.