caspase-9 Plasmide Double Nickase (m): sc-419470-NIC

Il gene murino **Casp9** codifica la **caspasi-9**, una proteasi iniziatrice a cisteina-aspartato che viene attivata nella via intrinseca mitocondriale dell’apoptosi in seguito al rilascio del citocromo c e all’assemblaggio dell’apoptosoma con **APAF1**. La caspasi-9 attivata cliva le caspasi effettrici come la caspasi-3 e la caspasi-7, coordinando la morte cellulare programmata, le risposte allo stress mitocondriale e il rimodellamento tissutale durante lo sviluppo. L’attività della caspasi-9 è modulata dalle proteine della famiglia **BCL-2** e dalle **IAP** (inhibitor of apoptosis proteins), collegandola alle vie di segnalazione del danno al DNA, dello stress del reticolo endoplasmatico (ER) e dello stress ossidativo. Una deregolazione dell’apoptosi dipendente da **CASP9** è stata implicata nella biologia dei tumori, nella neurodegenerazione e nell’omeostasi immunitaria, rendendo **Casp9** un nodo chiave per lo studio delle decisioni sul destino cellulare nei modelli murini.

caspase-9 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Casp9 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Casp9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Casp9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Casp9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.