Plasmide Double Nickase (h) caspase-7: sc-401301-NIC

CASP7 code la caspase-7, une protéase effectrice cystéine-aspartate activée en aval des caspases initiatrices lors des voies apoptotiques intrinsèque et extrinsèque. Une fois maturée, la caspase-7 clive un large ensemble de substrats afin de provoquer la condensation de la chromatine, le remodelage du cytosquelette et le démantèlement ordonné de la cellule, en agissant de concert avec la caspase-3. L’activité de CASP7 s’inscrit à l’interface des réponses au stress mitochondrial, des voies des récepteurs de mort et de contextes inflammatoires où la protéolyse apoptotique façonne l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation de la signalisation de la caspase-7 a été associée à des modifications des seuils de mort cellulaire observées dans la biologie des cancers, les maladies neurodégénératives et des pathologies liées au système immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour les études mécanistiques de l’apoptose.

caspase-7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASP7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASP7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASP7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASP7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.