casein kinase IIα Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418515-LAC

CSNK2A1 codifica la subunità alfa catalitica della caseina chinasi II (CK2α), una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che fosforila un’ampia gamma di substrati coinvolti nella trasduzione del segnale, nella trascrizione e nel controllo del ciclo cellulare. CK2α partecipa a vie di segnalazione come NF-κB, Wnt/β-catenina e PI3K/AKT, contribuendo a coordinare le risposte ai segnali di crescita e allo stress cellulare. Attraverso la regolazione di proteine associate alla cromatina, di fattori della risposta al danno al DNA e di modulatori dell’apoptosi, CSNK2A1 influenza la sopravvivenza cellulare e la proteostasi. Un’attività di CK2 disregolata è stata collegata ad alterazioni della proliferazione e a una segnalazione aberrante in molteplici contesti patologici, rendendo CSNK2A1 un nodo ampiamente studiato nelle reti di fosfo-segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale casein kinase IIα (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CSNK2A1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale casein kinase IIα (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CSNK2A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di casein kinase IIα. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CSNK2A1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.