casein kinase IIα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418515-ACT

CSNK2A1 codifica la subunità alfa catalitica della caseina chinasi II (CK2α), una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che fosforila un ampio spettro di substrati nucleari e citoplasmatici. CK2α integra segnali lungo vie fondamentali che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA, la dinamica della cromatina, la trascrizione e la traduzione, con ruoli documentati nelle reti di segnalazione Wnt/β-catenina, NF-κB, PI3K–AKT e MAPK. Attraverso la regolazione dell’apoptosi, della proteostasi e dell’adattamento allo stress, CK2α contribuisce all’omeostasi cellulare in molteplici contesti tissutali. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di CSNK2A1 sono state associate a proliferazione deregolata e a fenotipi dello sviluppo, a sostegno della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca sulle vie di segnalazione rilevanti per la malattia.

casein kinase IIα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CSNK2A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

casein kinase IIα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CSNK2A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CSNK2A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di casein kinase IIα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CSNK2A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da casein kinase IIα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via casein kinase IIα nelle cellule tumorali con espressione di CSNK2A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.