Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CARM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425576
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CARM1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CARM1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CARM1 Antibody (D-6): sc-390656
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CARM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-425576 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Carm1 codifica la coattivatrice associata alla metiltransferasi dell’arginina 1 (CARM1/PRMT4), una metiltransferasi dell’arginina che agisce su proteine istoniche e non istoniche e che regola l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. CARM1 metila substrati quali l’istone H3 (ad es., H3R17/H3R26) e regolatori della trascrizione, coordinando l’espressione genica dipendente dall’RNA polimerasi II, lo splicing alternativo e la trascrizione in risposta ai segnali. Nelle cellule murine, Carm1 influenza vie associate alla segnalazione dei recettori nucleari e dei fattori di crescita, alle decisioni di destino cellulare e al controllo epigenetico della differenziazione e della proliferazione. L’attività deregolata di CARM1 è ampiamente studiata in contesti di regolazione trascrizionale aberrante, difetti dello sviluppo e segnalazione oncogenica, rendendola un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle reti epigenetiche e trascrizionali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CARM1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Carm1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Carm1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Carm1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CARM1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Carm1 per lo studio della segnalazione di CARM1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Carm1 critici per la funzione di CARM1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Carm1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CARM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CARM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Carm1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CARM1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CARM1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Carm1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Carm1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.