Plasmide CRISPR d'Activation (h) CapZ-α1: sc-405348-ACT

CAPZA1 code CapZ-α1, une protéine de coiffage de l’extrémité barbelée des filaments d’actine qui s’associe à des sous-unités β pour réguler la dynamique de polymérisation de l’actine, la stabilité des filaments et le remodelage du cytosquelette. En contrôlant l’assemblage de l’actine au front de migration et au sein des fibres de stress, CapZ-α1 influence la forme cellulaire, l’adhérence et la motilité, en s’intégrant aux voies qui gouvernent le renouvellement des adhésions focales et la mécanotransduction. L’activité de CAPZA1 est également liée à l’organisation sarcomérique et contractile de l’actine, ce qui soutient les études de l’architecture du cytosquelette dans des états cellulaires différenciés et prolifératifs. Un coiffage et un remodelage de l’actine dérégulés sont fréquemment impliqués dans des phénotypes pertinents pour l’invasion oncogénique, l’intégrité structurelle des cardiomyocytes et d’autres troubles où des mécaniques cytosquelettiques altérées contribuent à la pathologie.

CapZ-α1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAPZA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CapZ-α1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAPZA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAPZA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CapZ-α1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAPZA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CapZ-α1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CapZ-α1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CAPZA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.