CapG Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419438-ACT

Il gene murino **Capg** codifica **CapG**, una proteina della famiglia gelsolina/villina che cappuccia l’estremità “barbed” dei filamenti di actina ed è regolata dal calcio e dai fosfoinositidi; modula il turnover dell’actina senza recidere i filamenti. CapG sostiene processi di rimodellamento del citoscheletro, tra cui ruffling di membrana, fagocitosi e migrazione cellulare, collegando l’architettura dinamica dell’F-actina agli input di segnalazione che controllano motilità e adesione. Attraverso queste funzioni, CapG è rilevante per le vie che regolano il traffico delle cellule immunitarie e il comportamento dei macrofagi, e la sua espressione alterata è stata studiata in contesti di invasione aberrante e fenotipi simili alla metastasi. Il suo ruolo nel rimodellamento dipendente dall’actina lo rende anche un nodo utile per indagare il controllo citoscheletrico della forma cellulare, dell’endocitosi e della meccanotrasduzione.

CapG Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Capg senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CapG Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Capg nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Capg, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CapG. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Capg nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CapG nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CapG nelle cellule tumorali con espressione di Capg silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.