Caper Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416921

Panoramica

RBM39 codifica la proteina umana legante l’RNA Caper, un fattore nucleare di splicing che collega la trascrizione al processamento del pre-mRNA attraverso interazioni con componenti dello spliceosoma e co-regolatori trascrizionali. Caper contribuisce alle decisioni di splicing alternativo e ai programmi di metabolismo dell’RNA che modellano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e l’espressione genica in risposta allo stress. Un’attività deregolata di RBM39 e pattern di splicing aberranti sono stati collegati a esiti di segnalazione oncogenica e a una composizione del proteoma alterata in molteplici contesti tumorali. Di conseguenza, RBM39 viene spesso studiato per mettere in relazione la funzione dello spliceosoma con il riorientamento delle vie di segnalazione e con meccanismi dell’RNA alla base di fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Caper (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RBM39 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RBM39 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RBM39 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Caper.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RBM39 per lo studio della segnalazione di Caper, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RBM39 critici per la funzione di Caper
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RBM39 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Caper CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Caper CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RBM39. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Caper Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Caper (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RBM39 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RBM39 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.