CaMKV Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433479

Panoramica

Camkv codifica CaMKV, una proteina atipica simile alle chinasi proteiche CaMK dipendenti dalla calmodulina, arricchita nei neuroni e implicata nella segnalazione dipendente dall’attività. Sebbene sia stato riportato che presenti un’attività catalitica limitata o atipica rispetto alle CaMK canoniche, CaMKV partecipa a reti regolatorie legate a Ca2+/calmodulina che influenzano la segnalazione sinaptica, l’organizzazione del citoscheletro e la differenziazione neuronale. Attraverso questi processi, Camkv è stato collegato a vie che governano la crescita dei neuriti e la plasticità, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sullo sviluppo e sulle disfunzioni del sistema nervoso. L’alterata regolazione di nodi di segnalazione responsivi al Ca2+, come CaMKV, viene spesso indagata nel contesto di fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici in sistemi modello.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CaMKV (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Camkv in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Camkv insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Camkv a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CaMKV.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Camkv per lo studio della segnalazione di CaMKV, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Camkv critici per la funzione di CaMKV
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Camkv per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CaMKV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CaMKV CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Camkv. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CaMKV Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CaMKV (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Camkv per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Camkv definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.