CaMKKβ Plasmide Double Nickase (h): sc-400928-NIC

CAMKK2 codifica la protein chinasi chinasi 2 calcio/calmodulina-dipendente (CaMKKβ), una chinasi Ser/Thr a monte che collega la segnalazione Ca2+–calmodulina alla fosforilazione di AMPK e di CaMKI/CaMKIV, coordinando così il sensing energetico cellulare, i programmi trascrizionali e le risposte allo stress dipendenti dal calcio. Attraverso questi nodi, CaMKKβ influenza il rimodellamento metabolico, la funzione mitocondriale, l’autofagia e vie a valle quali mTOR e la segnalazione associata a CREB. L’attività di CAMKK2 è stata studiata in contesti che includono il metabolismo delle cellule tumorali, l’infiammazione e la polarizzazione delle cellule immunitarie, e la segnalazione neuronale, rendendolo un bersaglio utile per analizzare le cascate di chinasi guidate dal calcio. La perturbazione di CAMKK2 può modificare fenotipi proliferativi e di sopravvivenza ed è stata associata, in sistemi sperimentali, a cambiamenti rilevanti per la malattia nella regolazione metabolica e neuroendocrina.

CaMKKβ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAMKK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAMKK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAMKK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAMKK2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.