CaMKII beta Plasmide Double Nickase (h): sc-402744-NIC

CAMK2B codifica CaMKII beta, una subunità chinasi serina/treonina dipendente da calcio/calmodulina che traduce i transitori intracellulari di Ca2+ in eventi di fosforilazione che regolano la segnalazione sinaptica e la plasticità strutturale. CaMKII beta contribuisce all’assemblaggio dell’oloenzima e alle interazioni con l’F-actina, collegando l’ingresso di Ca2+ al rimodellamento del citoscheletro, alla dinamica delle spine dendritiche e all’espressione genica dipendente dall’attività. Agisce a valle della segnalazione glutammatergica e delle vie di ingresso del Ca2+, coordinando processi quali il potenziamento a lungo termine e lo sviluppo neuronale. Un’attività o un’espressione deregolata di CaMKII beta è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e ad alterazioni dell’eccitabilità neuronale, a supporto della sua rilevanza in studi meccanicistici della funzione cerebrale e delle reti di segnalazione associate a malattia.

CaMKII beta Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAMK2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAMK2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAMK2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAMK2B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.