CaMKII beta Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402744-ACT

CAMK2B codifica la subunità beta di CaMKII, una chinasi serina/treonina Ca2+/calmodulina-dipendente che integra i transitori intracellulari di calcio in programmi di fosforilazione che controllano la segnalazione sinaptica e la plasticità strutturale. CaMKII beta contribuisce all’assemblaggio dell’oloenzima, al targeting subcellulare e alle interazioni con il citoscheletro di actina che modellano il rimodellamento delle spine dendritiche e la neurotrasmissione dipendente dall’attività. Nei neuroni, CAMK2B partecipa a vie associate alla segnalazione del recettore NMDA, alla potenziamento a lungo termine/depressione a lungo termine e alla regolazione genica calcio-dipendente. Una segnalazione CaMKII deregolata e cambiamenti di rete associati a CAMK2B sono stati implicati in fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per studiare la funzione e la plasticità dei circuiti neuronali.

CaMKII beta Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAMK2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CaMKII beta Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAMK2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAMK2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CaMKII beta. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAMK2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CaMKII beta nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CaMKII beta nelle cellule tumorali con espressione di CAMK2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.