Calregulin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400775-LAC

CALR codifica la calreticulina, uno chaperone luminale del reticolo endoplasmatico (RE) che lega Ca²⁺ e coordina il ripiegamento e il controllo qualità delle glicoproteine attraverso il ciclo calnexina/calreticulina. La calreticulina sostiene la proteostasi del RE cooperando con ERp57 e con le vie degli chaperoni lectinici per regolare la formazione dei ponti disolfuro, la ritenzione nel RE e il traffico delle proteine secretorie e di membrana nascenti. Al di fuori del RE, la calreticulina influenza l’omeostasi del Ca²⁺, l’adesione dipendente dalle integrine e la segnalazione da stress collegata alla risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). Alterazioni dell’attività di CALR e delle risposte da stress del RE sono associate a segnalazione immunitaria disregolata e a fenotipi oncogenici, e le mutazioni di CALR hanno una rilevanza consolidata nelle neoplasie mieloproliferative, motivando studi meccanicistici sulle conseguenze per il ripiegamento proteico e la segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale Calregulin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CALR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Calregulin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CALR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Calregulin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CALR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.