Calponin 3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402465-NIC

CNN3 codifica la calponina 3, una proteina regolatrice legante l’actina che modula l’architettura del citoscheletro, la contrattilità actomiosinica e i cambiamenti di forma cellulare importanti per l’adesione e la motilità. La calponina 3 partecipa a reti di segnalazione che collegano la dinamica dell’actina a processi quali l’organizzazione delle fibre di stress, la meccanotrasduzione e programmi di differenziamento in cellule mesenchimali e simili a quelle del muscolo liscio. Un’alterata espressione di CNN3 o la localizzazione della calponina 3 è stata associata a migrazione e invasività disregolate in modelli di cancro e a fenotipi legati al rimodellamento della matrice extracellulare. Queste funzioni rendono CNN3 un bersaglio rilevante per studiare le vie actina-dipendenti alla base della morfogenesi dei tessuti, di comportamenti simili alla riparazione delle ferite e della plasticità cellulare associata alle malattie.

Calponin 3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CNN3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CNN3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CNN3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CNN3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.