Calpain 10 Plasmide Double Nickase (h): sc-405032-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Calpain 10 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Calpain 10 Double Nickase Plasmid (h) e il Calpain 10 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CAPN10. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Calpain 10 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405032-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Calpain 10 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405032-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CAPN10 codifica la calpaina 10, un’atipica proteasi a cisteina regolata dal calcio, implicata in una proteolisi limitata che modula il turnover proteico, la dinamica del citoscheletro e la trasduzione del segnale. La calpaina 10 è stata collegata all’omeostasi mitocondriale, alla segnalazione insulinica e alle risposte allo stress metabolico, influenzando processi quali l’utilizzo del glucosio e l’adattamento cellulare allo stato nutrizionale. La variabilità genetica e l’alterata attività di CAPN10 sono state associate alla suscettibilità a fenotipi metabolici, inclusi l’insulino-resistenza e tratti correlati al diabete di tipo 2, a supporto della sua rilevanza nella biologia delle malattie metaboliche. Nei modelli cellulari, la perturbazione di CAPN10 viene utilizzata per indagare la regolazione, dipendente dalle proteasi, della funzione degli organelli, della segnalazione di stress e del riorientamento delle vie di segnalazione.
Calpain 10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAPN10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAPN10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAPN10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAPN10 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.