CALHM1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407600-ACT

CALHM1 (modulatore 1 dell’omeostasi del calcio) codifica un canale ionico della membrana plasmatica che contribuisce alla conduttanza permeabile al calcio e al rilascio di ATP, collegando segnali extracellulari alla dinamica intracellulare del Ca2+ e alla segnalazione purinergica. L’attività di CALHM1 influenza l’eccitabilità neuronale, la funzione sinaptica e l’accoppiamento stimolo-secrezione modulando il potenziale di membrana e le cascate di segnalazione Ca2+-dipendenti. Nel sistema nervoso centrale, CALHM1 è stato studiato nel contesto di vie correlate all’amiloide e della segnalazione neuroinfiammatoria, a sostegno della sua rilevanza per la ricerca meccanicistica sulla neurodegenerazione e sui fenotipi cognitivi. La regolazione, mediata dal canale, dell’efflusso di ATP lo rende inoltre un bersaglio utile per analizzare la comunicazione intercellulare in tessuti eccitabili ed epiteliali.

CALHM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CALHM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CALHM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CALHM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CALHM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CALHM1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CALHM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CALHM1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CALHM1 nelle cellule tumorali con espressione di CALHM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.