CAF-1 p150 Plasmide Double Nickase (h): sc-402472-NIC

CHAF1A codifica la subunità p150 del fattore 1 di assemblaggio della cromatina (CAF-1), uno chaperone degli istoni che deposita H3–H4 sul DNA di nuova sintesi durante la fase S e in seguito a danno al DNA. CAF-1 p150 coordina l’assemblaggio dei nucleosomi accoppiato alla replicazione, l’ereditarietà epigenetica e il ripristino della struttura della cromatina dopo la riparazione, collegando la dinamica della cromatina alla stabilità del genoma. Attraverso interazioni con PCNA e con i macchinari di replicazione/riparazione, CHAF1A influenza la replicazione del DNA, la ricombinazione omologa e le vie di segnalazione dei checkpoint. La deregolazione dell’attività di CAF-1 è associata a stress replicativo, programmi trascrizionali alterati e fenotipi di instabilità genomica osservati in biologia del cancro e in altri modelli di malattie legate alla cromatina.

CAF-1 p150 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHAF1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHAF1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHAF1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHAF1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.