cadherin-26 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-401989-ACT-2

Il gene umano CDH26 codifica la caderina-26, una proteina di adesione cellula–cellula dipendente dal calcio che contribuisce all’organizzazione della barriera epiteliale e alla stabilità delle giunzioni intercellulari attraverso interazioni omofiliche tra caderine. L’attività di CDH26 si intreccia con reti di segnalazione legate all’adesione, includendo il rimodellamento del citoscheletro e vie associate alle giunzioni che modellano l’architettura tissutale e il dialogo immuno-epiteliale. Un’alterata espressione di CDH26 è stata riportata in contesti infiammatori e allergici, sostenendo l’interesse a indagarne il ruolo nella biologia mucosale, nella funzione dell’epitelio delle vie aeree e del tratto gastrointestinale e nel rimodellamento associato alla barriera. L’editing o la perturbazione del gene CDH26 consentono studi meccanicistici sulla differenziazione epiteliale, sulla dinamica dell’adesione e sui programmi trascrizionali a valle, utilizzando sistemi modello umani pertinenti in vitro e in vivo.

cadherin-26 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH26 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cadherin-26 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH26 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH26, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cadherin-26. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH26 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cadherin-26 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cadherin-26 nelle cellule tumorali con espressione di CDH26 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.