cadherin-26 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-401989-ACT-2

O CDH26 humano codifica a caderina-26, uma proteína de adesão célula–célula dependente de cálcio que contribui para a organização da barreira epitelial e para a estabilidade das junções intercelulares por meio de interações homofílicas entre caderinas. A atividade do CDH26 se integra a redes de sinalização associadas à adesão, incluindo a remodelação do citoesqueleto e vias ligadas às junções que moldam a arquitetura tecidual e a comunicação entre o sistema imune e o epitélio. Alterações na expressão de CDH26 foram relatadas em contextos inflamatórios e alérgicos, sustentando a investigação de seu papel na biologia das mucosas, na função do epitélio das vias aéreas e do trato gastrointestinal e no remodelamento associado à barreira. A edição gênica ou perturbação de CDH26 permite estudos mecanísticos sobre a diferenciação epitelial, a dinâmica de adesão e programas transcricionais downstream usando sistemas de modelos humanos relevantes in vitro e in vivo.

cadherin-26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH26 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cadherin-26 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH26 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH26, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cadherin-26. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH26 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cadherin-26 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cadherin-26 em células tumorais com expressão de CDH26 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.