cadherin-24 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401990-ACT

CDH24 codifica la caderina-24, una proteina di adesione cellula-cellula dipendente dal calcio che contribuisce all’organizzazione e alla stabilità dei contatti epiteliali tramite le giunzioni aderenti mediate dalle caderine. Sostenendo interazioni omofiliche a livello della membrana plasmatica e collegandosi alle reti del citoscheletro attraverso complessi associati alle catenine, la caderina-24 può influenzare l’architettura tissutale, la polarità e la segnalazione dipendente dal contatto. Alterazioni nei pattern di espressione delle caderine sono spesso associate a cambiamenti nella coesione cellulare e nel comportamento migratorio, rendendo CDH24 un bersaglio utile per studiare il rimodellamento dell’adesione nello sviluppo e nei fenotipi associati a malattia. La disregolazione di CDH24 è stata indagata in contesti in cui l’integrità epiteliale e la segnalazione giunzionale risultano perturbate, offrendo un punto di accesso funzionale per studi meccanicistici sulle vie di adesione cellulare.

cadherin-24 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH24 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cadherin-24 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH24 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH24, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cadherin-24. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH24 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cadherin-24 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cadherin-24 nelle cellule tumorali con espressione di CDH24 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.