cadherin-16 Plasmide Double Nickase (h): sc-401598-NIC

CDH16 codifica la caderina-16, una molecola di adesione cellula-cellula calcio-dipendente, arricchita nell’epitelio tubulare renale, che contribuisce a mantenere la polarità epiteliale e l’architettura dei tessuti. Attraverso l’adesione omofilica e l’interazione con le catenine, la caderina-16 influenza l’assemblaggio delle giunzioni aderenti, l’organizzazione del citoscheletro e processi di segnalazione legati alla differenziazione epiteliale e alla funzione di barriera. Un’alterata espressione di CDH16 è associata a una compromissione dell’integrità dei tubuli ed è stata riportata nella fisiopatologia renale e nella biologia dei tumori del rene, a supporto della sua utilità come marcatore e nodo funzionale nella regolazione dello stato epiteliale. Lo studio della caderina-16 offre indicazioni sul rimodellamento delle giunzioni, sulla plasticità epiteliale e sui cambiamenti dipendenti dal contesto nei programmi di adesione cellulare.

cadherin-16 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDH16 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDH16. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDH16. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDH16 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.