CA V Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419455

Panoramica

Car5a codifica l’anidrasi carbonica mitocondriale V (CA V), una metalloenzima allo zinco che catalizza l’idratazione reversibile della CO₂ per generare bicarbonato nella matrice mitocondriale. Questo apporto di bicarbonato sostiene reazioni anaplerotiche e biosintetiche alimentando enzimi dipendenti dalla carbossilazione, collegando Car5a a vie metaboliche quali gluconeogenesi, ureagenesi e metabolismo dei lipidi e degli amminoacidi. Nei tessuti murini ad alta richiesta metabolica, l’attività della CA V contribuisce alla regolazione del pH mitocondriale e del flusso di carbonio, influenzando così l’equilibrio energetico cellulare e l’omeostasi dei metaboliti. Alterazioni della funzione dell’anidrasi carbonica mitocondriale sono state associate a disregolazione metabolica e possono essere studiate nel contesto di disturbi che colpiscono la gestione dell’azoto e il metabolismo intermedio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CA V (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Car5a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Car5a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Car5a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CA V.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Car5a per lo studio della segnalazione di CA V, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Car5a critici per la funzione di CA V
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Car5a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CA V CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CA V CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Car5a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CA V Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CA V (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Car5a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Car5a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.