CA II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401059

Panoramica

L’anidrasi carbonica II (CA II), codificata dal gene umano **CA2**, è un metalloenzima citosolico ad elevata attività che catalizza l’idratazione reversibile della CO₂ a bicarbonato e protoni, regolando così il pH intracellulare, il trasporto di CO₂ e la disponibilità di bicarbonato. Tramite l’accoppiamento con trasportatori di bicarbonato e meccanismi di gestione dei protoni, la CA II sostiene l’omeostasi acido-base in numerosi tessuti e contribuisce a processi quali il trasporto ionico epiteliale, il riassorbimento osseo mediato dagli osteoclasti e lo scambio di gas negli eritrociti. L’attività di **CA2** interseca la regolazione metabolica sensibile al pH e le risposte cellulari allo stress, in cui un’alterata funzione dell’anidrasi carbonica può influenzare la segnalazione e l’attività enzimatica a valle della dinamica dei protoni. La perturbazione genetica e funzionale di **CA2** è stata associata a disturbi dell’equilibrio acido-base e della mineralizzazione, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici della fisiologia dipendente dal pH e di fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CA II (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CA II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CA2 per lo studio della segnalazione di CA II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CA2 critici per la funzione di CA II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CA II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CA II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CA II Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CA II (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.