C8β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408409

Panoramica

C8B codifica la catena beta del componente C8 del complemento (C8β), una subunità essenziale dell’eterotrimero C8 (C8α, C8β, C8γ) che partecipa all’attivazione terminale del complemento. All’interno delle cascate del complemento classica, della lectina e alternativa, C8β contribuisce a stabilizzare l’assemblaggio del complesso di attacco alla membrana (MAC; C5b-9) sulle membrane bersaglio, favorendo la formazione di pori e la funzione effettrice litica. Questa attività contribuisce alla difesa immunitaria innata, alla segnalazione infiammatoria e al crosstalk con processi legati all’opsonizzazione e alla coagulazione. Un’alterata funzione terminale del complemento, inclusa la disregolazione del MAC, è associata a una maggiore suscettibilità alle infezioni e a danno tissutale mediato dal sistema immunitario, rendendo C8B un bersaglio rilevante per la ricerca in immunologia e infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C8β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C8B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C8B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C8B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C8β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C8B per lo studio della segnalazione di C8β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C8B critici per la funzione di C8β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C8B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C8β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C8β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C8B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C8β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C8β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C8B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C8B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.