C6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419396

Panoramica

Il gene C6 del topo codifica il componente del complemento C6, una proteina della via terminale necessaria per l’assemblaggio del complesso di attacco alla membrana (MAC, C5b-9) che forma pori litici sulle membrane bersaglio. In seguito all’attivazione del complemento attraverso le vie classica, lectinica o alternativa, C6 si lega a C5b e avvia il reclutamento di C7, C8 e C9, collegando l’opsonizzazione e la segnalazione infiammatoria al danno diretto di membrana. L’attività di C6 influenza la sorveglianza immunitaria innata, le interazioni ospite–patogeno e la regolazione dei microambienti infiammatori. Un’attività terminale del complemento deregolata è stata associata a danno tissutale infiammatorio e immuno-mediato, rendendo C6 un bersaglio utile per studi meccanicistici della patologia guidata dal complemento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C6 per lo studio della segnalazione di C6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni C6 critici per la funzione di C6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.