C5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401533-LAC

Il componente 5 del complemento (C5) è un effettore centrale della cascata del complemento, che collega l’attività della convertasi di C3 alla formazione della convertasi di C5 e alla successiva generazione di C5a e C5b. La scissione proteolitica di C5 produce C5a, una potente anafilotossina che segnala attraverso i recettori di C5a per regolare la chemiotassi dei leucociti, il rilascio di citochine e l’infiammazione vascolare, e C5b, che avvia l’assemblaggio del complesso terminale del complemento (MAC, C5b-9) in grado di lisare le cellule suscettibili. Attraverso questi processi, C5 integra il riconoscimento immunitario innato con l’amplificazione infiammatoria, il supporto all’opsonofagocitosi e l’eliminazione dei patogeni. Un’attivazione disregolata di C5 è implicata nella patobiologia infiammatoria e autoimmune e nel danno tissutale mediato dal complemento, motivo per cui sono condotti studi meccanicistici in modelli immunitari e vascolari.

Le particelle di attivazione lentivirale C5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di C5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale C5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione C5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di C5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo C5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.