Partículas Lentivirales de Activación (h) C5: sc-401533-LAC

El componente 5 del complemento (C5) es un efector central de la cascada del complemento, ya que vincula la actividad de la convertasa de C3 con la formación de la convertasa de C5 y la posterior generación de C5a y C5b. La escisión proteolítica de C5 produce C5a, una potente anafilotoxina que señaliza a través de los receptores de C5a para regular la quimiotaxis de leucocitos, la liberación de citocinas y la inflamación vascular, y C5b, que inicia el ensamblaje del complejo terminal del complemento (MAC, C5b-9), capaz de lisar células susceptibles. A través de estos procesos, C5 integra el reconocimiento inmunitario innato con la amplificación de la inflamación, el apoyo a la opsonofagocitosis y la eliminación de patógenos. La activación desregulada de C5 se ha implicado en la fisiopatología inflamatoria y autoinmunitaria y en el daño tisular mediado por el complemento, lo que impulsa estudios mecanísticos en modelos inmunitarios y vasculares.

Las partículas de activación lentiviral C5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de C5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral C5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción C5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de C5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo C5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.