C3aR Plasmide Double Nickase (h): sc-401448-NIC

C3AR1 codifica il recettore per il componente 3a del complemento (C3aR), un recettore accoppiato a proteine G che lega l’anafilotossina C3a, mettendo in collegamento l’attivazione del complemento con le risposte cellulari. La segnalazione mediata da C3aR coinvolge le vie Gαi/Gαq per modulare i flussi intracellulari di calcio, le cascate MAPK/ERK e i programmi chemiotattici che determinano il traffico leucocitario e il rilascio di mediatori infiammatori. Nelle cellule mieloidi e nelle cellule immunitarie residenti nei tessuti, C3aR integra segnali dell’immunità innata con reti citochiniche e può influenzare la funzione di barriera e la comunicazione neuro-immunitaria. Un’attività disregolata di C3AR1 è stata implicata in fenotipi infiammatori e autoimmuni, nell’immunopatologia associata alle infezioni e nel rimodellamento del microambiente tumorale, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla biologia delle malattie guidate dal complemento.

C3aR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus C3AR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di C3AR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di C3AR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con C3AR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.