Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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C3aR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419392
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- C3aR Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico C3aR, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: C3aR Antibody (D-12): sc-133172
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
C3aR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419392 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **C3ar1** codifica il recettore del componente del complemento 3a (C3aR), un recettore accoppiato a proteine G che lega l’anafilotossina C3a generata durante l’attivazione del complemento. La segnalazione di C3aR modula la chemiotassi dei leucociti, la degranulazione, il rilascio di citochine e le risposte vascolari, integrando i segnali dell’immunità innata con le vie a valle MAPK, PI3K/AKT e dipendenti dal calcio. Nelle cellule mieloidi, nella microglia e in altri compartimenti immunoresponsivi, C3aR contribuisce alla risoluzione dell’infiammazione così come alla sua amplificazione, a seconda del contesto. Un’attività di C3aR disregolata è stata implicata in modelli di infiammazione allergica delle vie aeree, patologie autoimmuni, immunopatologia associata alle infezioni e processi neuroinfiammatori.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C3aR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene C3ar1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del C3ar1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto C3ar1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C3aR.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di C3ar1 per lo studio della segnalazione di C3aR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni C3ar1 critici per la funzione di C3aR
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di C3ar1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal C3aR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C3aR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus C3ar1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal C3aR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C3aR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia C3ar1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio C3ar1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.