Plásmido CRISPR de Activación (h) C1QBP: sc-400911-ACT

C1QBP (proteína de unión a C1q del complemento; p32/gC1qR) es una proteína humana multifuncional enriquecida en mitocondrias y también detectada en otros compartimentos celulares, donde contribuye a la fosforilación oxidativa, a procesos asociados al ribosoma mitocondrial y a la regulación de las respuestas celulares al estrés. Al influir en la homeostasis de proteínas mitocondriales y en la bioenergética, C1QBP vincula el control metabólico con el procesamiento de ARN y con vías de señalización que moldean la proliferación y la apoptosis. La expresión o localización alteradas de C1QBP se han asociado con una función mitocondrial desregulada y con señalización inflamatoria, contextos estudiados con frecuencia en biología del cáncer, neurodegeneración y fisiopatología relacionada con el sistema inmunitario. En consecuencia, C1QBP se utiliza ampliamente como un nodo para desentrañar mecanismos centrados en la mitocondria que acoplan el metabolismo con decisiones sobre el destino celular.

C1QBP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C1QBP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C1QBP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C1QBP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C1QBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C1QBP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C1QBP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C1QBP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C1QBP en células tumorales con expresión de C1QBP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.