C1QBP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400911-ACT

C1QBP (proteina legante C1q del complemento; p32/gC1qR) è una proteina umana multifunzionale, arricchita nei mitocondri e rilevabile anche in altri compartimenti cellulari, dove contribuisce alla fosforilazione ossidativa, a processi associati ai ribosomi mitocondriali e alla regolazione delle risposte cellulari allo stress. Influenzando l’omeostasi delle proteine mitocondriali e la bioenergetica, C1QBP collega il controllo metabolico con l’elaborazione dell’RNA e con vie di segnalazione che modellano proliferazione e apoptosi. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di C1QBP sono state associate a una funzione mitocondriale deregolata e a una segnalazione infiammatoria aberrante, contesti frequentemente studiati nella biologia del cancro, nella neurodegenerazione e nella fisiopatologia immuno-mediata. Di conseguenza, C1QBP è ampiamente utilizzata come nodo per dissezionare meccanismi mitocondrio-centrici che accoppiano il metabolismo alle decisioni sul destino cellulare.

C1QBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C1QBP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C1QBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C1QBP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C1QBP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C1QBP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C1QBP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C1QBP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C1QBP nelle cellule tumorali con espressione di C1QBP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.