C1q-C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403618-ACT

C1QC codifica la catena C del componente del complemento C1q, una molecola di riconoscimento iniziale della via classica del complemento che si lega a complessi immuni e a strutture self alterate per innescare l’attivazione del complemento a valle. Oltre alla proteolisi del complemento, C1q influenza la clearance fagocitica, la rimozione delle cellule apoptotiche e la segnalazione infiammatoria attraverso interazioni con recettori di superficie su cellule mieloidi e cellule immunitarie residenti nei tessuti. La biologia di C1q è strettamente legata alla sorveglianza immunitaria innata e all’omeostasi tissutale, e un’attività del complemento disregolata è stata associata a infiammazione cronica e fenotipi simili all’autoimmunità. Un’espressione alterata di C1QC è inoltre utilizzata come marcatore di specifici stati di macrofagi/microglia rilevanti per la neuroinfiammazione e per microambienti immunitari associati a fibrosi o tumori.

C1q-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di C1QC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

C1q-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus C1QC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione C1QC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di C1q-C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus C1QC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da C1q-C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via C1q-C nelle cellule tumorali con espressione di C1QC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.