C17orf59 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412334

Panoramica

BORCS6 (C17orf59) è un componente fondamentale del BORC (BLOC-1–related complex), che regola il posizionamento e il trasporto anterogrado dei lisosomi lungo i microtubuli, modellando la distribuzione degli organelli e i processi periferici dipendenti dai lisosomi. Attraverso l’accoppiamento, dipendente da BORC, con Arl8 e i motori kinesinici, C17orf59 contribuisce alle dinamiche del traffico endolisosomiale che influenzano la funzione dell’asse autofagia-lisosoma, la segnalazione dei nutrienti e il rimodellamento delle membrane. L’alterazione dell’attività di BORC può compromettere la dispersione dei lisosomi e la gestione del carico, collegando questa via a risposte cellulari allo stress e a fenotipi rilevanti per la neurobiologia e per la funzione delle cellule immunitarie. In quanto gene umano coinvolto nella logistica degli organelli, BORCS6 è spesso studiato nel contesto del trasporto intracellulare, del metabolismo guidato dai lisosomi e dei difetti di trafficking associati a meccanismi di malattia complessi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C17orf59 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BORCS6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BORCS6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BORCS6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C17orf59.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BORCS6 per lo studio della segnalazione di C17orf59, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BORCS6 critici per la funzione di C17orf59
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BORCS6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C17orf59 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal C17orf59 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BORCS6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C17orf59 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR C17orf59 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BORCS6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BORCS6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.