C10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422846

Panoramica

Il gene murino **Ccl6** codifica la chemochina **C10**, un ligando secreto della famiglia CC che promuove il reclutamento chemiotattico di monociti/macrofagi e di altre popolazioni mieloidi verso siti di stress tissutale. C10 attiva la segnalazione dei recettori delle chemochine, innescando vie accoppiate a proteine G collegate al rimodellamento dell’actina, alla migrazione cellulare e alle reti di citochine infiammatorie, modulando il traffico dei leucociti e l’attivazione dell’immunità innata. L’espressione di **Ccl6** è comunemente associata a microambienti ricchi di macrofagi e può influenzare processi quali la riparazione delle ferite, il rimodellamento fibrotico e le risposte dell’ospite alle infezioni. Gradienti chemochinici disregolati che coinvolgono C10 sono rilevanti in modelli sperimentali di infiammazione cronica, in cui un’infiltrazione mieloide alterata contribuisce alla patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C10 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl6 per lo studio della segnalazione di C10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl6 critici per la funzione di C10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C10 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C10 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.