Partículas Lentivirales de Activación (m) c-Rel: sc-422641-LAC

Mouse Rel codifica c-Rel, un miembro de la familia de factores de transcripción NF-κB que regula programas génicos dependientes de estímulos que controlan la activación de linfocitos, la producción de citocinas, la supervivencia celular y la diferenciación. c-Rel se activa aguas abajo de los receptores de antígeno, los receptores tipo Toll y la señalización del receptor de TNF mediante la fosforilación mediada por IKK y la degradación proteasomal de los inhibidores IκB, lo que permite la translocación al núcleo y la unión a promotores y potenciadores. Su actividad configura vías inflamatorias y de regulación inmunitaria, incluido el control por retroalimentación de la señalización de NF-κB y la coordinación con las redes de AP-1 e IRF. La señalización desregulada de c-Rel se ha relacionado con una activación inmunitaria aberrante y patología inflamatoria, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos en inmunología y modelos de señalización relevantes para enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral c-Rel (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Rel en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral c-Rel (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Rel, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de c-Rel. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Rel y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.