c-Rel CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400478-ACT

REL kodiert c-Rel, ein Mitglied der NF-κB-Familie von Transkriptionsfaktoren, das induzierbare Genexpressionsprogramme reguliert, welche Immunaktivierung, Entzündung, Zellüberleben und Proliferation steuern. c-Rel ist an der kanonischen NF-κB-Signalübertragung downstream von Rezeptoren wie dem T‑Zell‑Rezeptor, B‑Zell‑Rezeptor, TNF‑Rezeptor und Toll-like-Rezeptoren beteiligt und koordiniert transkriptionelle Antworten auf Zytokine und mikrobielle Stimuli. Eine dysregulierte REL-Aktivität wurde mit veränderter Lymphozytendifferenzierung und aberranter Zytokinproduktion in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext immunvermittelter Pathologien und onkogener NF-κB-Signalgebung untersucht. Als nuklearer Effektor dieser Signalwege wird c-Rel zudem oft hinsichtlich seiner Rolle bei der Umprogrammierung transkriptioneller Netzwerke, bei Stressantworten und bei der kontextabhängigen Kontrolle der Apoptose erforscht.

c-Rel Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen REL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

c-Rel Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des REL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der REL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen c-Rel-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native REL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von c-Rel-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des c-Rel-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem REL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.