C-Nap1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421134

Panoramica

Cep250 codifica C-Nap1, una proteina centrosomiale a coiled-coil concentrata alle estremità prossimali dei centrioli, dove contribuisce alla coesione del centrosoma e all’organizzazione del materiale pericentriolare. C-Nap1 agisce nelle dinamiche del centrosoma regolate dal ciclo cellulare, coordinandosi con la segnalazione mediata da chinasi e con proteine scaffold per supportare l’assemblaggio del fuso bipolare, la corretta segregazione dei cromosomi e il mantenimento dell’architettura dei microtubuli. L’alterazione della coesione del centrosoma e dell’integrità del fuso è strettamente associata a instabilità genomica, divisione cellulare anomala e fenotipi di sviluppo o neurodegenerativi nei sistemi modello. Negli studi su cellule e tessuti murini, Cep250 è quindi un nodo utile per analizzare le vie associate al centrosoma che influenzano proliferazione, differenziamento e omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C-Nap1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cep250 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cep250 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cep250 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C-Nap1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cep250 per lo studio della segnalazione di C-Nap1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cep250 critici per la funzione di C-Nap1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cep250 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C-Nap1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C-Nap1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cep250. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C-Nap1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C-Nap1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cep250 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cep250 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.